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　　豬冷凍精液的研究從20世紀(jì)六七十年代開始，于國外研究機構(gòu)領(lǐng)先開展，目前已成熟應(yīng)用于種質(zhì)資源的保留和遠(yuǎn)距離運輸。在中國大力普及推廣豬人工授精技術(shù)的過去10年中，養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達(dá)國家關(guān)于冷凍精液的研究始終處于領(lǐng)先地位，最近3年，我國養(yǎng)豬大型企業(yè)，例如溫氏集團(tuán)、廣西揚翔在此方面也投入大量精力，進(jìn)行很好的嘗試，效果顯著。在第九屆全國豬人工授精關(guān)鍵技術(shù)研討會上，邀請了三位中外專家就冷凍精液的制作使用進(jìn)行了全面到位的闡釋，同時，百鈞達(dá)科技發(fā)展（北京）有限公司攜帶自主研發(fā)的解凍精子活率高達(dá)80%以上的技術(shù)進(jìn)行現(xiàn)場演示，將會議氣氛推向高潮。

　　專家報告

　　北京農(nóng)學(xué)院倪和民教授——豬冷凍精液研究與應(yīng)用進(jìn)展：

　　豬精液冷凍保存的優(yōu)勢體現(xiàn)在，延長種公豬使用年限；獲得更大的遺傳進(jìn)展；取代活體公豬的引進(jìn)；優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源跨地區(qū)相互整合；減少雜質(zhì)、細(xì)菌污染，提高精液品質(zhì)；縮小種豬場養(yǎng)殖規(guī)模，降低生產(chǎn)成本等。

　　豬精液常見冷凍劑型包含平膠袋、鋁袋，顆粒凍精，0.25 mL細(xì)管，5 mL 大管，每一種都各有利弊。

　　通過比較BTS、Schonow、葡-檸-EDTA和ZO四種稀釋劑發(fā)現(xiàn)，ZO液在17℃條件下保存的精子，具有較高的活力。

　　通過研究冷凍保護(hù)劑發(fā)現(xiàn)，甘油濃度為5%的精子活力最好；用乙二醇作為冷凍保護(hù)劑時，3%的乙二醇濃度冷凍精液效果要優(yōu)于5%和7%的乙二醇濃度；在精液冷凍過程中，采用DMSO作為冷凍保護(hù)劑時，冷凍精液的效果均很不理想；甘油和乙二醇聯(lián)合使用時，甘油5%+乙二醇1%組冷凍效果在質(zhì)膜完整率、頂體完整率、畸形率方面性能優(yōu)良；采用211g/min離心時，解凍后精子活力為0.31，優(yōu)于800g/min和2400g/min；采用一次稀釋法，解凍后精液活力、質(zhì)膜完整率和頂體完整率均優(yōu)于二次稀釋法；豬精子密度為0.5×109個/mL時，冷凍效果較好；平衡時間為2 h，豬精液品質(zhì)最好；采用-120℃平衡10min，解凍后精子活力為0.36，質(zhì)膜完整率和頂體完整率較好；采用37℃ 30s方法解凍，精子活力、質(zhì)膜完整率、頂體完整率最好，畸形率最低。在37℃ 30s水浴解凍方法更為適合0.25mL細(xì)管豬凍精解凍；肝素上游法誘發(fā)的B型精子率最高，與對照組、鈣離子載體誘導(dǎo)法和咖啡因誘導(dǎo)法存在顯著差異；孵育40min，B型精子率最高；孵育120min，AR型精子率最高，孵育40min誘發(fā)AR型最低。

　　采用冷凍皮特蘭種公豬精液給30頭母豬輸精后，有24頭母豬兩個情期未返情，妊娠率達(dá)80%，平均產(chǎn)仔8.4頭；采用3000rpm，10min離心，解凍后精液品質(zhì)最好；平衡2～3h可提高精子的抗冷打擊能力，同時冷凍保護(hù)劑可與精子充分接觸達(dá)到冷凍保護(hù)效果；始凍溫度為-150 ℃組解凍后精液品質(zhì)最好；始凍溫度低于-150 ℃時各項指標(biāo)有下降趨勢，說明冷凍速率并不是越快越好；采用40℃，40s水浴解凍，解凍后精液各項指標(biāo)最好；精子密度為1.2×109個/mL時，解凍后精液品質(zhì)最好；冷凍稀釋液中添加3%甘油凍后精液品質(zhì)最好。

　　在3個種豬場人工授精母豬共36頭，同一情期連續(xù)兩次人工授精，妊娠率達(dá)到66%以上，平均窩產(chǎn)子數(shù)這說明本試驗得到的5mL細(xì)管豬精液冷凍方法具有一定的實用性，但妊娠率低于0.25mL細(xì)管冷凍精液。

　　豬的精液冷凍技術(shù)還存在許多問題, 但豬精液冷凍技術(shù)在試驗研究、物種保存、雜交育種和擴(kuò)大繁殖等實踐中,依然具有很廣闊的應(yīng)用和發(fā)展前景，同時與牛冷凍精液高度商業(yè)化相比，豬凍精技術(shù)尚處初級階段，市場應(yīng)用前景廣闊。

　法國IMV（卡蘇）公司技術(shù)專家GUYDELHOMME——豬冷凍精液生產(chǎn)制作流程：

　　目前，全球豬鮮精配種使用率≥99.5%，凍精配種使用率只有不到0.5%，但因為凍精使得精液保存和運輸不再受稀釋劑因素制約，促進(jìn)了優(yōu)秀種豬基因的國際傳播，讓高品質(zhì)基因系的保存更簡便，建立遺傳多樣性/遺傳資源生物樣本庫。同時，使用凍精能有助于將來進(jìn)行系譜檢測和種豬選擇，可用于配種優(yōu)秀的和情期不規(guī)律且不可預(yù)知的后備母豬。所以，冷凍精液技術(shù)的研究推廣還是大有意義的。

　　在精液使用前，需要對其進(jìn)行安全衛(wèi)生評估，為了有效使用凍精，精液冷凍、解凍和配種技術(shù)必須簡易但精確，這是確保受胎率和窩產(chǎn)仔數(shù)接近于鮮精操作結(jié)果的*途徑。

　　豬冷凍精液的生產(chǎn)制作流程大致分為公豬篩選、采精及檢測、配制稀釋液、制作凍精四個過程，使用時要先解凍再輸精。

　　用于生產(chǎn)豬冷凍精液的精子應(yīng)符合如下要求：活力不低于85%，正常精子不低于85%，活率不低于90%，頂體完整率不低于90%。稀釋液配制過程中，稀釋用水必須是無熱原水、雙蒸水或同等品質(zhì)的實驗室用水，需使用合適的消毒過的玻璃器皿和磁力加熱攪拌器配制。鮮精稀釋后，豬精液冷凍步驟為：離心、冷卻、冷凍、凍精保存。豬凍精解凍操作需小心謹(jǐn)慎，輸精前需使用CASA系統(tǒng)檢測精子活力和形態(tài)，解凍后的精液在1h內(nèi)用于輸精，采用子宮內(nèi)輸精可有效提高受胎率和產(chǎn)仔數(shù)。

　　吉林省農(nóng)科院畜牧所李兆華研究員——豬冷凍精液的應(yīng)用研究：

　　我國從50年代初期開始對豬精液冷凍技術(shù)進(jìn)行探索，近幾年，包括中國農(nóng)業(yè)大學(xué)等多家科研單位及百鈞達(dá)科技發(fā)展（北京）有限公司、溫氏集團(tuán)等企業(yè)都在進(jìn)行豬冷凍精液的研究。其中，百鈞達(dá)科技發(fā)展（北京）有限公司取得豬冷凍精液技術(shù)的重大進(jìn)展。解凍后使用只能容下單層精子活動空間的專用精子計數(shù)板在顯微鏡同一焦距視野下，精子活力已經(jīng)達(dá)到80%以上，38℃條件下可存活5～6小時，通過對近一年冷配母豬進(jìn)行統(tǒng)計，發(fā)情正常健康的母豬情期受胎率胎率達(dá)88.5%，平均產(chǎn)仔數(shù)11.2頭，已經(jīng)達(dá)到常溫液態(tài)精液的繁育水平。

　　目前，豬冷凍精液應(yīng)用的研究集中于冷凍技術(shù)，即冷凍稀釋液配方的研究，稀釋液主要成份為營養(yǎng)劑、抗冷凍保護(hù)劑，此外還有各種抗氧化成分、抗生素、調(diào)節(jié)滲透壓、酸堿平衡的物質(zhì)等。

　　凍精的承載工具目前有顆粒、0.25/0.5/5ml規(guī)格細(xì)管、5ml扁平塑料袋。凍精在輸精時多使用深部輸精技術(shù)，如輸卵管輸精法、子宮角輸精法和子宮體輸精法。深部輸精要求環(huán)境安靜放松、無需刺激，其掌握程度也對影響凍精的受胎率有很大作用。

　　百鈞達(dá)公司凍精解凍現(xiàn)場演示

　　俗話說“眼見為實”，為了讓會議代表深刻理解并相信百鈞達(dá)公司在豬冷凍精液技術(shù)方面的突破，公司特將凍精解凍的現(xiàn)場“搬”到了會場。在現(xiàn)場的冷凍精液的解凍及活力演示中，代表們表現(xiàn)出驚喜和歡迎，簇?fù)碇菔菊?，生怕漏掉任何一個細(xì)節(jié)，期待親眼見證解凍凍精高達(dá)76%-85%的活率。

　　誠如報告專家介紹的，目前全球冷凍精液配種使用率只有不到0.5%，但憑借其在保種、存種、運輸上的便利與可持久性，冷凍精液技術(shù)的研究和推廣只會更加深入。加之如果百鈞達(dá)公司研發(fā)的，可使凍精使用效率達(dá)到鮮精水平的類似技術(shù)得到商業(yè)化應(yīng)用，那么冷凍精液技術(shù)對于優(yōu)秀遺傳物質(zhì)利用和種公豬飼養(yǎng)成本降低而言，對國內(nèi)乃至世界的養(yǎng)豬行業(yè)發(fā)展都將是大有裨益。