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　　豬冷凍精液的研究從20世紀六七十年代開始，于國外研究機構領先開展，目前已成熟應用于種質(zhì)資源的保留和遠距離運輸。在中國大力普及推廣豬人工授精技術的過去10年中，養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達國家關于冷凍精液的研究始終處于領先地位，最近3年，我國養(yǎng)豬大型企業(yè)，例如溫氏集團、廣西揚翔在此方面也投入大量精力，進行很好的嘗試，效果顯著。在第九屆全國豬人工授精關鍵技術研討會上，邀請了三位中外專家就冷凍精液的制作使用進行了全面到位的闡釋，同時，百鈞達科技發(fā)展（北京）有限公司攜帶自主研發(fā)的解凍精子活率高達80%以上的技術進行現(xiàn)場演示，將會議氣氛推向高潮。

　　專家報告

　　北京農(nóng)學院倪和民教授——豬冷凍精液研究與應用進展：

　　豬精液冷凍保存的優(yōu)勢體現(xiàn)在，延長種公豬使用年限；獲得更大的遺傳進展；取代活體公豬的引進；優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源跨地區(qū)相互整合；減少雜質(zhì)、細菌污染，提高精液品質(zhì)；縮小種豬場養(yǎng)殖規(guī)模，降低生產(chǎn)成本等。

　　豬精液常見冷凍劑型包含平膠袋、鋁袋，顆粒凍精，0.25 mL細管，5 mL 大管，每一種都各有利弊。

　　通過比較BTS、Schonow、葡-檸-EDTA和ZO四種稀釋劑發(fā)現(xiàn)，ZO液在17℃條件下保存的精子，具有較高的活力。

　　通過研究冷凍保護劑發(fā)現(xiàn)，甘油濃度為5%的精子活力最好；用乙二醇作為冷凍保護劑時，3%的乙二醇濃度冷凍精液效果要優(yōu)于5%和7%的乙二醇濃度；在精液冷凍過程中，采用DMSO作為冷凍保護劑時，冷凍精液的效果均很不理想；甘油和乙二醇聯(lián)合使用時，甘油5%+乙二醇1%組冷凍效果在質(zhì)膜完整率、頂體完整率、畸形率方面性能優(yōu)良；采用211g/min離心時，解凍后精子活力為0.31，優(yōu)于800g/min和2400g/min；采用一次稀釋法，解凍后精液活力、質(zhì)膜完整率和頂體完整率均優(yōu)于二次稀釋法；豬精子密度為0.5×109個/mL時，冷凍效果較好；平衡時間為2 h，豬精液品質(zhì)最好；采用-120℃平衡10min，解凍后精子活力為0.36，質(zhì)膜完整率和頂體完整率較好；采用37℃ 30s方法解凍，精子活力、質(zhì)膜完整率、頂體完整率最好，畸形率最低。在37℃ 30s水浴解凍方法更為適合0.25mL細管豬凍精解凍；肝素上游法誘發(fā)的B型精子率最高，與對照組、鈣離子載體誘導法和咖啡因誘導法存在顯著差異；孵育40min，B型精子率最高；孵育120min，AR型精子率最高，孵育40min誘發(fā)AR型最低。

　　采用冷凍皮特蘭種公豬精液給30頭母豬輸精后，有24頭母豬兩個情期未返情，妊娠率達80%，平均產(chǎn)仔8.4頭；采用3000rpm，10min離心，解凍后精液品質(zhì)最好；平衡2～3h可提高精子的抗冷打擊能力，同時冷凍保護劑可與精子充分接觸達到冷凍保護效果；始凍溫度為-150 ℃組解凍后精液品質(zhì)最好；始凍溫度低于-150 ℃時各項指標有下降趨勢，說明冷凍速率并不是越快越好；采用40℃，40s水浴解凍，解凍后精液各項指標最好；精子密度為1.2×109個/mL時，解凍后精液品質(zhì)最好；冷凍稀釋液中添加3%甘油凍后精液品質(zhì)最好。

　　在3個種豬場人工授精母豬共36頭，同一情期連續(xù)兩次人工授精，妊娠率達到66%以上，平均窩產(chǎn)子數(shù)這說明本試驗得到的5mL細管豬精液冷凍方法具有一定的實用性，但妊娠率低于0.25mL細管冷凍精液。

　　豬的精液冷凍技術還存在許多問題, 但豬精液冷凍技術在試驗研究、物種保存、雜交育種和擴大繁殖等實踐中,依然具有很廣闊的應用和發(fā)展前景，同時與牛冷凍精液高度商業(yè)化相比，豬凍精技術尚處初級階段，市場應用前景廣闊。

　法國IMV（卡蘇）公司技術專家GUYDELHOMME——豬冷凍精液生產(chǎn)制作流程：

　　目前，全球豬鮮精配種使用率≥99.5%，凍精配種使用率只有不到0.5%，但因為凍精使得精液保存和運輸不再受稀釋劑因素制約，促進了優(yōu)秀種豬基因的國際傳播，讓高品質(zhì)基因系的保存更簡便，建立遺傳多樣性/遺傳資源生物樣本庫。同時，使用凍精能有助于將來進行系譜檢測和種豬選擇，可用于配種優(yōu)秀的和情期不規(guī)律且不可預知的后備母豬。所以，冷凍精液技術的研究推廣還是大有意義的。

　　在精液使用前，需要對其進行安全衛(wèi)生評估，為了有效使用凍精，精液冷凍、解凍和配種技術必須簡易但精確，這是確保受胎率和窩產(chǎn)仔數(shù)接近于鮮精操作結果的*途徑。

　　豬冷凍精液的生產(chǎn)制作流程大致分為公豬篩選、采精及檢測、配制稀釋液、制作凍精四個過程，使用時要先解凍再輸精。

　　用于生產(chǎn)豬冷凍精液的精子應符合如下要求：活力不低于85%，正常精子不低于85%，活率不低于90%，頂體完整率不低于90%。稀釋液配制過程中，稀釋用水必須是無熱原水、雙蒸水或同等品質(zhì)的實驗室用水，需使用合適的消毒過的玻璃器皿和磁力加熱攪拌器配制。鮮精稀釋后，豬精液冷凍步驟為：離心、冷卻、冷凍、凍精保存。豬凍精解凍操作需小心謹慎，輸精前需使用CASA系統(tǒng)檢測精子活力和形態(tài)，解凍后的精液在1h內(nèi)用于輸精，采用子宮內(nèi)輸精可有效提高受胎率和產(chǎn)仔數(shù)。

　　吉林省農(nóng)科院畜牧所李兆華研究員——豬冷凍精液的應用研究：

　　我國從50年代初期開始對豬精液冷凍技術進行探索，近幾年，包括中國農(nóng)業(yè)大學等多家科研單位及百鈞達科技發(fā)展（北京）有限公司、溫氏集團等企業(yè)都在進行豬冷凍精液的研究。其中，百鈞達科技發(fā)展（北京）有限公司取得豬冷凍精液技術的重大進展。解凍后使用只能容下單層精子活動空間的專用精子計數(shù)板在顯微鏡同一焦距視野下，精子活力已經(jīng)達到80%以上，38℃條件下可存活5～6小時，通過對近一年冷配母豬進行統(tǒng)計，發(fā)情正常健康的母豬情期受胎率胎率達88.5%，平均產(chǎn)仔數(shù)11.2頭，已經(jīng)達到常溫液態(tài)精液的繁育水平。

　　目前，豬冷凍精液應用的研究集中于冷凍技術，即冷凍稀釋液配方的研究，稀釋液主要成份為營養(yǎng)劑、抗冷凍保護劑，此外還有各種抗氧化成分、抗生素、調(diào)節(jié)滲透壓、酸堿平衡的物質(zhì)等。

　　凍精的承載工具目前有顆粒、0.25/0.5/5ml規(guī)格細管、5ml扁平塑料袋。凍精在輸精時多使用深部輸精技術，如輸卵管輸精法、子宮角輸精法和子宮體輸精法。深部輸精要求環(huán)境安靜放松、無需刺激，其掌握程度也對影響凍精的受胎率有很大作用。

　　百鈞達公司凍精解凍現(xiàn)場演示

　　俗話說“眼見為實”，為了讓會議代表深刻理解并相信百鈞達公司在豬冷凍精液技術方面的突破，公司特將凍精解凍的現(xiàn)場“搬”到了會場。在現(xiàn)場的冷凍精液的解凍及活力演示中，代表們表現(xiàn)出驚喜和歡迎，簇擁著演示者，生怕漏掉任何一個細節(jié)，期待親眼見證解凍凍精高達76%-85%的活率。

　　誠如報告專家介紹的，目前全球冷凍精液配種使用率只有不到0.5%，但憑借其在保種、存種、運輸上的便利與可持久性，冷凍精液技術的研究和推廣只會更加深入。加之如果百鈞達公司研發(fā)的，可使凍精使用效率達到鮮精水平的類似技術得到商業(yè)化應用，那么冷凍精液技術對于優(yōu)秀遺傳物質(zhì)利用和種公豬飼養(yǎng)成本降低而言，對國內(nèi)乃至世界的養(yǎng)豬行業(yè)發(fā)展都將是大有裨益。